Caracterização molecular e eficácia imunológica da frutose

Parasites & Vectors volume 16, Número do artigo: 169 (2023) Cite este artigo

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Os carrapatos são ectoparasitas hematófagos obrigatórios que transmitem uma variedade de patógenos para humanos, animais silvestres e domésticos. A vacinação é um método eficaz e ecológico de controle de carrapatos. A frutose-1,6-bifosfato aldolase (FBA) é uma importante enzima glicometabólica que é uma vacina candidata contra parasitas. No entanto, a proteção imunológica do FBA em carrapatos não é clara.

O quadro de leitura aberta (ORF) de 1092 pb de FBA de Haemaphysalis longicornis (HlFBA), que codifica uma proteína de 363 aminoácidos, foi clonado usando metodologia de PCR. O vetor procariótico de expressão pET32a(+)-HlFBA foi construído e transformado em células da cepa Escherichia coli BL21(DE3) para expressão de proteínas. A proteína recombinante HlFBA (rHlFBA) foi purificada por cromatografia de afinidade, e os resultados de western blot sugeriram que a proteína rHlFBA era imunogênica.

Os resultados do ensaio imunossorvente ligado a enzima mostraram que coelhos imunizados com rHlFBA produziram uma resposta imune humoral específica para rHlFBA. Um ensaio de infestação de carrapatos indicou que, em comparação com os carrapatos do grupo tiorredoxina marcada com histidina (Trx), o peso do carrapato ingurgitado e a oviposição de carrapatos fêmeas e a taxa de eclosão de ovos daqueles no grupo rHlFBA foi reduzido em 22,6%, 45,6% e 24,1%, respectivamente. Com base no efeito cumulativo desses três parâmetros, a eficácia imunológica geral do rHlFBA foi estimada em 68,4%.

A FBA é uma vacina anticarrapato candidata que pode reduzir significativamente o peso ingurgitado do carrapato, a oviposição e a taxa de eclosão dos ovos. A utilização de enzimas envolvidas no metabolismo da glicose é uma nova estratégia no desenvolvimento de vacinas anticarrapatos.

Os carrapatos, artrópodes hematófagos obrigatórios, são os principais vetores de patógenos em humanos e animais em todo o mundo [1]. Tanto os carrapatos quanto os micróbios que eles transmitem são ameaças significativas à saúde humana e veterinária [2]. Haemaphysalis longicornis (Acari: Ixodidae) é uma espécie de carrapato nativa da Ásia Oriental e se estabeleceu na Austrália, Nova Zelândia e várias ilhas do Pacífico [3]. Transmite patógenos como Theileria uilenbergi, Babesia motasi, Rickettsia hebeiii e Anaplasma phagocytophilum [4,5,6,7]. É também o vetor da febre severa com o vírus da síndrome de trombocitopenia (SFTSV), que põe em risco a saúde humana e animal [8]. Portanto, é imperativo desenvolver um anti-H. vacina longicornis [9, 10].

Galay et ai. avaliaram dois tipos de ferritinas de proteínas de ligação ao ferro de H. longicornis (HlFER), uma HlFER1 intracelular e uma HlFER2 secretora, como vacinas anticarrapatos [11]. Os resultados do Western blot demonstraram que os anticorpos reagiram de forma cruzada com o HlFER recombinante (rHlFER) e também reagiram com HlFERs nativos. Um experimento de desafio com carrapatos demonstrou que os carrapatos alimentados com o coelho inoculado com rHlFER2 tinham menor peso de ingurgitamento do que os carrapatos do grupo controle. A oviposição e a eclodibilidade foram reduzidas em ambos os grupos inoculados com rHlFER. A eficácia da vacina de rHlFER1 e rHlFER2 foi de 34% e 49%, respectivamente [11]. Em outro estudo, o quadro de leitura aberta (ORF) da subolesina de H. longicornis (HlSu) foi identificado e o HlSu recombinante (rHlSu) expresso em Escherichia coli [12]. Coelhos imunizados com rHlSu produziram uma resposta imune. No grupo imunizado com rHlSu, o peso ao ingurgitamento e a oviposição das fêmeas foram significativamente menores do que no grupo controle. A eficácia calculada da vacina foi estimada em 37,4% [12]. Em um estudo posterior, Wang et al. clonou o gene homólogo da lipocalina de H. longicornis (HlLIP) em pET-32(a+) para obter a proteína recombinante (rHlLIP); a imunogenicidade de RHlLIP foi confirmada por western blot [13]. Um ensaio de imunização em coelhos infestados com H. longicornis mostrou que os anticorpos contra a proteína rHlLIP reduziram o peso de ingurgitamento, oviposição e incubabilidade (a eficácia vacinal da proteína rHlLIP foi de 60,17%). No entanto, até o momento, um anti-H. a vacina longicornis não está disponível atualmente, por isso é importante rastrear um antígeno protetor eficiente contra a infestação por H. longicornis.